口腔鳞癌中Ets-2、MMP-9表达及其意义

【摘要】 目的 探讨Ets-2、MMP-9在口腔鳞癌中的表达。方法 应用PV-9000两步免疫组织化学染色法检测Ets-2、MMP-9在68例口腔鳞癌组织、19例口腔粘膜上皮异常增生组织和15例正常口腔粘膜组织的表达情况，分析其在口腔粘膜癌变过程中的变化趋势及在各组间表达的差异。结果 1.Ets-2三组总体及组间比较均有显著性差异(P＜0.05)；在OSCC患者按年龄、性别、瘤体大小等分组间比较Ets-2的表达无显著性差异(P＞0.05)；在按有无淋巴结转移、临床分期等分组间比较Ets-2的表达差异有显著性差异(P＜0.05)。2. MMP-9的表达三组总体差异及组间差异均有统计学意义(P＜0.05)。在OSCC患者按年龄、性别、瘤体大小等分组间比较MMP-9表达无显著性差异(P＞0.05)；在按有无淋巴结转移、临床分期等分组间比较MMP-9的表达差异有显著性差异(P＜0.05)。3.在口腔鳞癌组织中，Ets-2与MMP-9的表达存在正相关关系(r=0.153，P＜0.05)。结论 Ets-2、MMP-9的异常表达可能在口腔鳞癌的发生发展中起重要的作用。
【关键词】 口腔鳞状细胞癌 Ets-2 MMP-9 免疫组织化学
【Abstract】 Aim To investigate the expression of Ets-2、MMP-9 in oral squamous cell carcinorma.Methods The two-step immunohistochemistry technique (PV-9000), was used to discover the expression of Ets-2 and MMP-9 in 68 OSCC tissues, 19 DOM tissues and 15 NOM tissues, and to analyze their expressions in different tissues. Results 1 As to the expression of Ets-2,statistical significance was observed between the highly and moderately as well as poorly groups (P＜0.05),but not between moderately and poorly groups(P=0.534).The results showed there was no significant difference between the groups divided by sex, age and size of tumor(P＞0.05),but it linked with lymph node metastasis and TNM stage (P＜0.05).2 As to the expression of MMP-9,statistical significance was observed between the highly and moderately as well as poorly groups (P＜0.05),but not between moderately and poorly groups(P=0.589).The results showed there was no significant difference between the groups divided by sex, age and size of tumor(P＞0.05), but it related with lymph node metastasis and TNM stage(P＜0.05).3 There was positive correlation between Ets-2 and MMP-9 in oral squamous cell carcinorma(r=0.153,P＜0.005). Conclusion The imbalance of Ets-2、MMP-9 may play an important orl in the occurrence and development of oral squamous cell carcinorma.
【Keywords】 Oral squamous cell carcinoma Ets-2;MMP-9 immunohisto- chemistry

Ets-2（人红血细胞增多症病毒致癌基因同源体2）是Ets家族转录因子的一员，它在肿瘤、骨发育和免疫应答中扮演重要角色[1]。它在膀胱癌、肝癌、乳腺癌等中高表达，故而有学者把它列为一种致癌基因。MMP-9则属于Ⅳ型胶原酶或明胶酶。在正常的生理情况下，基质金属蛋白酶和基质金属蛋白酶组织抑制因子(Tissue Inhibitors of Metalloproteinases，TIMPs)保持在一定的平衡状态，从而维持机体的正常状，使组织屏障的完整性得以维护[2]。在肿瘤发展的过程中，MMP-9通过降解细胞外基质(Extracellular Matrix, ECM)中的型胶原使癌细胞突破原发部位正常的基底膜(Basement Membrane, BM)而发生浸润及转移。
1 资料与方法
1.1 临床资料选取郑州大学口腔医学院、河南省肿瘤医院、郑州大学第一附属医院2005-2008年手术切除的，且术后经病理检查确诊的原发口腔鳞状细胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma，OSCC )石蜡包埋标本68例。其中患者年龄35-79岁，男性40例，女性28例；所有患者均为首次治疗，且手术前未行放疗或化疗。全部标本均经常规福尔马林固定，石蜡包埋，4μm连续切片，分别用HE染色及免疫组化染色。肿瘤直径小于4cm者44例，不小于4cm者24例；有淋巴转移38例，无颈淋巴结转移30例；按鳞癌病理分级法，其中高分化鳞癌29例、中分化鳞癌25例、低分化鳞癌14例；肿瘤分期根据UICC2002标准，按TNM分期，Ⅰ期-Ⅱ期38例、Ⅲ期-Ⅳ期30例。
1.2 主要试剂 鼠抗人Ets-2单克隆抗体（即用型），鼠抗人MMP-9单克隆抗体浓缩液，PV-9000通用型两步法免疫组化染色试剂盒，均购自北京中山生物技术有限公司。
1.3 免疫组化检测 采用PV-9000两步免疫组织化学染色法检测，用已知阳性切片作为阳性对照，均以PBS液代替一抗作为阴性对照。
1.4 结果判定Ets-2:阳性染色定位于细胞浆；MMP-9阳性染色于细胞胞膜或胞浆。于显微镜下随机记数4个视野(10×40倍)，至少计数共400个细胞，计算平均每个视野下的阳性染色细胞数。用LI评价其表达水平。以阳性细胞比率＜5%为(-)，阳性细胞比率5-20%为(+)，阳性细胞比率＞20%为 (++)[3]。
1.5 统计学处理应用SPSS13.0统计软件，两组间比较、多组间的两两比较采用秩和检验(Wilcoxon两样本比较法)，x2检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析。取α=0.05为显著性检验水准。
2 结果
2.1 Ets-2在正常组织、上皮异常增生和口腔鳞癌组织的表达，差异有统计学意义（x2=49.575，P＜0.05）。MMP-9在正常组织、上皮异常增生和口腔鳞癌组织的表达，差异有统计学意义（x2=59.346，P＜0.05）。
2.2 OSCC中Ets-2、MMP-9的表达呈正相关。
表1. Ets-2在正常黏膜、上皮异常增生黏膜、口腔鳞癌中的表达
图1Ets-2在OSCC中的表达 （400×） 图2MMP-9在OSCC中的表达 （400×）
Fig.1 Expression of Ets-2 in OSCC Fig.2 Expression of MMP-9 in OSCC
3讨论
目前己明确Ets家族具有诸多的生物学功能，其中有参与细胞的生长分化、血管生成、肿瘤发生以及细胞迁移等过程[4]。Ets-2基因定位与21号染色体，是原癌基因家族中的一员，能够抑制细胞凋亡[5]。诸多研究表明，在多种肿瘤中组织中，Ets-2有异常的表达[6,7]。本研究结果显示， 在OSCC中Ets-2的表达与分化程度和临床分期有关。提示Ets-2在OSCC的发生发展中发挥关键的作用。因此，提示Ets-2有可能作为一个评价OSCC生物学行为的指标，检测Ets-2有助于口腔鳞癌的早期诊断及预后评定，指导临床治疗。
MMP-9属于Ⅳ型胶原酶，相对分子量较大，达到92KD；其人类基因定位于20q12-q13。研究表明[8]MMP-9与人体许多疾病有关，包括心血管疾病及癌症。Chen等[9]等研究表明MMP-9可以作为一个有效的指标作为判定口腔扁平苔藓潜在癌变的可能性。李珊昌等[10]认为MMP-9可以作为舌鳞癌早期诊断的指标。本研究验证了MMP-9在OSCC的高表达，能够反映肿瘤组织的侵袭力，能够评定肿瘤恶性程度及预测预后等。口腔鳞癌中Ets-2、MMP-9的表达呈正相关关系，提示MMP-9作为蛋白水解酶，能够降解ECM及BM，促进癌细胞的转移，而Ets-2可能通过某种机制调控MMP-9的表达来影响肿瘤的生物学特性。
总之,Ets-2和MMP-9在口腔鳞癌的发生发展中发挥着重要的作用，探讨两者者在OSCC发生发展中所发挥的作用，能够为OSCC的早期诊断、治疗以及及评估预后提供重要的参考价值。
参考文献
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