紫外线对真菌的影响生物杀虫剂作用于甘蔗螟虫

摘要
紫外辐射对昆虫病原真菌的影响可以很有偏见的产生
分生孢子损伤。配方可以帮助保护这些真菌结构免受辐射。
本研究的目的是评估紫外线辐射对纯和封装的影响。
conidia Beauveria bassiana和金龟子绿僵菌广义，并评估其致病性
对甘蔗螟虫、Diatraea saccharalis。纯分生孢子和褐藻酸钠
含有真菌的胶囊在不同温度下被紫外线照射。
曝光时间。在纯分生孢子上，辐射在5分钟后产生有害影响。
曝光，从94%到52%的萌发为B. bassiana和从96%到54%
M. anisopliae。海藻酸钠配方防辐射B. bassiana conidia
所有的时间都进行了评估（15分钟到48小时），因为即使暴露后，真菌也被评估。
仍然是可行的。干封装分生孢子球孢白僵菌引起79.6%死亡率的研究
害虫和绿僵菌引起的只有10%。
关键词
昆虫病原真菌、微生物控制、配方、Lepidoptera、紫外曝光
*
通讯作者。
如何引用本文：Rodrigues，I.M.W.，我，M.R.，达席尔瓦，M.F.G.F.，费尔南德斯，J.B.说，美国的影响（2016）
紫外辐射对Fungi Beauveria bassiana和金龟子绿僵菌、纯和封装，和生物杀虫剂
在Diatraea saccharalis行动。在昆虫学研究进展，4，151-162。http://dx.doi.org/10.4236/ae.2016.43016
I. M. W. Rodrigues等人。
1。介绍
昆虫病原真菌球孢白僵菌和绿僵菌对多种致病作用
农业害虫[ 1 ] [ 9 ]。它的使用被认为是环保的，是一个重要的工具。
集成了用于控制诸如Hemiptera、Coleoptera有机农业害虫和害虫控制，菜蛾
以及其他对经济重要作物如咖啡、甘蔗、柑橘类水果、蔬菜等的攻击，
大豆等微生物产品在农业中的应用优势（生物农药），是有可能的。
强调特异性和选择性，降低目标昆虫建立抗性的概率，持久的害虫。
控制，对环境和涂抹剂的毒性低，开发和登记成本低等。[ 10 ]。
然而，巴西现有的大多数微生物产品不是用来控制昆虫的，而是它们。
生产和利用自然。紫外辐射和高温降低了田间分生孢子的活力，
在农业中[ 11昆虫病原真菌的成功应用的主要障碍]。温度是重要的
昆虫病原真菌的因为它影响其代谢改变生产
酶、毒素、孢子萌发，萌发管的发展渗透，定植和繁殖。
另一方面，辐射可以影响孢子萌发和早期发育阶段。
发芽管[ 12 ]。据钟[ 13 ]，真菌球孢白僵菌失去感染能力下
直射阳光三小时。
为了保持田间的分生孢子活力，降低成本并确保生物控制，另一种方法是
使用可以提供诸如保护辐射分生孢子、增加货架等优点的产品。
居住和便利储存、运输等。[ 14 ] [ 15 ]。
目前市面上的生物农药中，约有25%的销售额是由产品构成的。
油分散，其余75%只作为技术产品出售，不加处理或添加。
确保运输、储存、搬运实用性、现场持久性等方面的改进的物质，
有效的虫害控制等。[ 16 ] [ 17 ]。微胶囊制剂（颗粒）含有微生物。
封装在材料中，如明胶、淀粉、纤维素、海藻酸钠等。[ 18 ]。每个粒子可以
含有数百个分生孢子，干燥后，贮藏期增加，适于食用。
农业用途，可直接应用于土壤或目标害虫，甚至在植物上，没有
在水性介质中分散的需要，便于应用[ 18 ]。这样封装的粒子可能是
用于控制各种害虫，由于使用的真菌种类繁多。
在农业害虫，蛀Diatraea saccharalis（鳞翅目：Crambidae）是一个突出的问题
甘蔗种植园。它是一种容易分散、攻击强度高、产量大的昆虫。
损失[ 19 ]。造成的损害可能是直接的，通过开放画廊在植物的茎，减少。
树液的流动，使其更容易因风和雨的作用而跌倒，
干旱等，但是，损害也可以是间接的，因为孔FA。2.2。褐藻酸钠分生孢子的制备
在1 L贝克尔中，用蒸馏水和氯化钙在0.03米的浓度下制备了一种溶液。
二贝克尔，1%（m/v）海藻酸钠混合真菌绿僵菌、白僵菌0.5%（m/v），
分别溶解，并添加吐温80 0.02%（M / V）。材料由涡轮增压均匀化。
在ULTRA-TURRAX提取，IKA T25设备。在剧烈搅拌下，氯化钙溶液缓慢。
加入海藻酸钠溶液和真菌，在轻度搅拌下形成胶囊。这个
相转移与蠕动泵完成，模型泵亲TPM×600 55rpm从品牌Watson Marlow
公司，设置为总滴35分钟/分钟。一旦胶囊形成，他们被放置，在蒸馏水洗。
去除多余氯化钙的水。获得干胶囊，干燥进行的烤箱在24˚C 48
对于真菌小时（专利号：BR10 2015 016269 3）。
2.3。紫外辐射测试
2.3.1。紫外辐射室（天然产物实验室/ ufscar）
在第一次试验中，B. bassiana和M. anisopliae的真菌孢子的纯粹进行抗紫外
辐射。1×孢子悬浮液105毫升1进行标准化。−在纽鲍尔室和评价
分生孢子萌发。一层薄薄的PDA（Potato Dextrose Agar）放在培养皿pentabiotic
（0.5克/升）避免细菌污染。固化后的介质，每个菜收到0.1。
在确定浓度下制备的真菌悬浮液ml。悬浮液随
帮助Drigalski spatula，然后便和适当冷却。
盘子被放置在一个腔室的g15t8e USHIO灯15W辐射（L = 45厘米，宽为2.6厘米，
USHIO、日本），其发射光谱集中在UV-B区（306毫米）。在这个实验中，
4室的灯被打开，相当于6153.3兆瓦的∙M−辐射和能量在2
22.15 kJ∙M−2室
∙H−1和两中心灯（5653兆瓦∙M−2或20.35 kJ∙M−2
∙H−1
）。辐射
用光谱仪进行测量（海洋光学模型USB2000 +拉德）连接到一个
便携式计算机。所用的房间是用完全内衬镜子的木头建成的（L＝60厘米，H＝40）。
厘米和W = 60厘米）不吸收辐射。灯的位置大约25厘米以上。
样品.每个灯都有一个双电压反应器和单独的开关驱动系统。下一部分是
存放样品的高度250毫米。右侧有一个300×150毫米穿孔网格和左
一边有两迷你风扇，“冷却器”，打开时，允许由制度空气的流通，使
其冷却。恒温器监控内部温度并控制其自动激活。
迷你风扇。前部有一个移动样品的门，恒温器和按钮来开关。
灯开或关。
含有真菌的菜肴保留了5, 10, 15、20, 25和30分钟。在去除
室，菜保持24小时在B.O.D.（生化需氧量）在25.5˚±0.5˚C和C
12小时的光周期。此后，在徕卡DM 500显微镜下观察菜肴。
放大倍数为400倍，计数100个分生孢子，萌发而不萌发，建立比值。
在第二个实验中，15个胶囊的配方被分离并放置在开放的培养皿中。
控制处理仍然与完全铝箔覆盖的菜肴。
样品的辐射量与先前所描述的4个灯相同。曝光
对于辐射和样品抽取，每15分钟发生一次，时间是3:30。
一百五十三
I. M. W. Rodrigues等人。
十二粒，每碟4，分发在培养皿（直径9厘米），含有20毫升的PDA。
培养在BOD在25.5˚C±0.5˚C和一个12小时的光照和从各殖民地的生长
胶囊观察7天以上。在此期间，计算了一个百分比，评估菌落数。
形成，考虑，每个胶囊将起源于一个殖民地。
第三个实验是根据前一节描述的方法进行的。然而,
样品在预定的2, 4, 6、8, 10, 12、24, 36和48小时内被去除，
并对菌落形成进行了分析。
2.3.2。紫外辐射室（微生物学实验室/ univap）
将样品放置在辐射室模型qsun xe3hc，其发射光谱集中在
UV-B辐射区（306 nm）。在这个实验中，4.977兆瓦∙M−2照度使用和能量内
房型为17.92 kJ∙M−2
∙H−1
。随着光谱使用测量辐照度（海洋光学
模型USB2000 + RAD）连接到便携式计算机。前部有一个移动样品的门。

对应于1.08，2.16光强，4.32和8.46 kJ∙平方米
，分别。作者证实，92%的
M菌的菌株，对球孢白僵菌绿僵菌的61%，只有3%的P.玫烟色26%
照射1小时后存活率超过50%。此外，所有M菌菌株，54%
对绿僵菌菌株，球孢白僵菌和只有21%的P.玫烟色42%显示0.1%以上
照射4小时后存活。这些结果表明，在1小时的曝光时间，真菌B. bassiana
是更耐比真菌绿僵菌。但随着4小时的曝光时间，M. anisopliae，
更宽容。在这项研究中，两种真菌在非处方分生孢子萌发时受损。
关于辐射的增加。在封装的真菌的情况下，辐射没有效果。
在不同的评估时间，容忍这种曝光48小时，而不损害
真菌生长。
[ 25 ]研究了辐射对真菌Clonostachys糠疹的影响，发现分生孢子萌发
与辐照度成反比。在较低剂量的辐射中，发芽率最高。
反之亦然。在紫外辐射不同菌株C.糠疹之间变化的敏感性观察。后2
小时的曝光（4.2 kJ∙M−2照射
两株菌株发芽率约为40%，存活率为五。
10%以下。62是最宽容的生产菌株，以超过60%的发芽率，显著
大于其他菌株。在这种情况下，配方的使用是非常必要的保护。
反对辐射，因为实际结果比其他作者发现的结果更有效率。
阳光的破坏作用意味着微生物控制剂在田间应用后的短期持久性。
因此，农民需要消耗更多的材料和更多的工作时间，连续还田
和最终生产成本的增加。这是增加所必须克服的挑战之一。
在使用生物农药以及农民的更多接受方面。考虑到这一点，大公司
一直致力于各种紫外线辐射防护剂的研制和掺入。
生产生物杀虫剂[ 27 ] [ 29 ]。这项研究的结果表明，除了协助
分生孢子、褐藻胶胶囊的光化学稳定性是一种低成本的产品。
[ 27 ]发现一个迅速失活的白僵菌分生孢子的发生暴露于紫外线光或自然后
阳光。然而，通过添加保护物质，灭活率降低了。不管怎样，各种
物质已被证明是无效的，关于他们的光防护性能测试时，在研究中。
与杆状病毒，如抗坏血酸，氧化锌，叶酸和糖蜜[ 30 ] [ 32 ]。在物质
通过评价，蛋清和牛奶粉是减少孢子失活最有效
率。可能的原因是，它的蛋白质含量吸收UV-B辐射[ 33 ]，并作为一个
分生孢子表面的保护屏障。在这项研究中，作为保护作用的产品是钠。
藻酸盐聚合物。
[ 34 ]研究了辐射对球孢白僵菌制剂封装与木质素聚合物的制备
喷雾干燥技术。作者的配方曝光时间为4, 8, 5，12, 17, 20，
24, 36和48小时，发现聚合物保护分生孢子，因为该制剂产生分生孢子。
死亡率降低十倍。虽然它们是不同的聚合物，但似乎在这两项研究中都存在。
真菌的保护。
这样，就可以通过增加保护性物质来进行研究。
更先进的配方，如在其组成中使用聚合物，具有保护作用，
是有道理的。在这项研究中，观察到海藻酸钠在胶囊中的存在。
维持孢子萌发的决定性作用。在最终配方中，胶囊有多种。
分生孢子聚集在一起，人们相信最里面的分生孢子囊被更好的保护。
增加辐射持续性的稳定性增益。尽管紫外线辐射是不电离的，但它起作用。
在表面上，并不能穿透胶囊，据了解，胶囊的目标是
到达，因为通过保护这个胶囊的内部免受太阳辐射的有害影响。
现场，有在可行的孢子是菌源的机会，引发流行病造成
害虫死亡率。
3.2。配制和非配制分生孢子致病性试验及毒力测定
适用于干、湿Diatraea saccharalis毛虫形式
非—因此，不同的真菌浓度应进行评估，以达到稳定性之间的平衡。
胶囊和真菌的释放。另一个可以考虑的重要因素是真菌。
在制定繁殖会在昆虫表面的相互作用。这些具体的交互作用仍然很小。
已知并可能受配方类型的影响[ 37 ]。
4。结论
UV-B辐射有害的真菌绿僵菌和B. bassiana在第一个5纯孢子
曝光分钟。
球孢白僵菌和绿僵菌配制真菌在海藻酸钠胶囊耐光化学
即使暴露于紫外线照射48小时后，孢子仍然存活。
B. bassiana和绿僵菌，非制定和海藻酸钠胶囊配制，致病性
为了研究昆虫D. saccharalis。
制备和应用该制剂的工艺对于覆盖分生孢子是有效的。
指真菌，归因于抗紫外线辐射等特性。
致谢
作者要感谢FAPESP（过程2011 / 03650-0）和金融支持的inct-cbip
这个研究项目中，生物防治和东洋纺公司做巴西提供真菌，邦芬厂
提供的毛毛虫，和博士drauzio E.N.兰赫尔提供紫外室。