舒筋活血片质量标准研究

【摘要】  目的 建立舒筋活血片的质量控制标准。方法 采用TLC法对狗脊进行鉴别；采用HPLC法对舒筋活血片中4?甲氧基水杨醛进行含量测定。色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇?0.1%磷酸溶液（体积比45∶55）为流动相，流速为1.0 ml/min，检测波长为278 nm。结果 TLC色谱中，在与狗脊对照药材相应位置显相同颜色的斑点。HPLC色谱中，4?甲氧基水杨醛在0.048～0.968μg范围内线性良好（r=0.999 6），平均回收率为100.86％，RSD为1.34％（n=6）。舒筋活血片中4?甲氧基水杨醛平均含量为0.40 mg/片。结论 狗脊的鉴别方法专属性强，4?甲氧基水杨醛的含量测定方法简便、准确，可为舒筋活血片的质量控制标准的提高提供依据。

【关键词】  舒筋活血片；狗脊；薄层色谱法；4?甲氧基水杨醛；高效液相色谱法

　　Abstract:Objective To establish the quality standard of Shujinhuoxue tablets. Methods TLC was used for the identification of Woodwardia japonica. 4?methoxysalicylaldehyde in the tablets was analyzed by HPLC. Samples were analyzed on an ODS?C18 column using methanol?0.1% phosphate (45∶55) as mobile phase. The flow rate was 1.0 ml/min and the detection wavelength 278 nm. Results It presented Dots from the tablets had the same color and position as control material when using TLC the identify the samples. The linear range of 4?methoxysalicylaldehyde was 0.048-0.968 μg with average recovery of 100.86%,RSD of 1.34%. The average concentration of 4?methoxysalicylaldehyde in one piece of tablet was 0.40 mg.Conclusion The method is simple, fast and accurate, which could be used for the quality control of Shujinhuoxue tablets.

　　Key words:Shujinhuoxue tablets； 4?methoxysalicylaldehyde； Woodwardia japonica； TLC； HPLC

　　舒筋活血片由红花、狗脊、香加皮等10味药材组成，具有舒筋活络、活血散瘀的功效，用于筋骨疼痛、肢体拘挛、腰背酸痛、跌打损伤的治疗。舒筋活血片质量标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》第13册，原标准未设含量测定项及狗脊鉴别项。为提高舒筋活血片的质量标准，参考文献［1-7］对方中4?甲氧基水杨醛含量测定与狗脊薄层色谱法鉴别进行研究，为该制剂的质量标准进一步修订提供了依据。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器

　　Agilent 1100液相色谱仪（紫外检测器，Agilent 10.02色谱工作站）；色谱柱为Shim?pack C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）。Branson SB 3200超声波清洗仪（上海，Branson）。

　　1.2  试剂与药品

　　4?甲氧基水杨醛对照品（含量测定用，批号为11790?200202）、原儿茶酸对照品（含量测定用，批号为110809?200503）、狗脊对照药材（批号为121071?200502）均由中国药品生物制品检定所提供；甲醇、磷酸（色谱纯，天津四友）；水为去离子纯化水；舒筋活血片（市售，批号080701、080901、081201，基片重0.3 g）。

　　2  方法与结果

　　2.1  狗脊的薄层色谱鉴别

　　取本品50片，除去糖衣，研细，取粉末10 g（相当于狗脊3 g），精密称定，加甲醇40 mL，超声30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加5%Na2CO3溶液10 mL使溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH至2，用乙酸乙酯萃取3次（每次10 mL），合并乙酸乙酯层，蒸干，加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取狗脊对照药材1 g，照供试品溶液制备法制成对照药材溶液。再按50片处方量称取处方中各药材（狗脊除外），依法制成缺狗脊的阴性颗粒，照供试品溶液制备法制成阴性溶液。再取原儿茶酸对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，上述3种溶液各10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷?乙酸乙酯?甲苯?甲酸（体积比8∶6∶3∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图1。

　　2.2  4?甲氧基水杨醛的含量测定

　　2.2.1  色谱条件

　　用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇?0.1%磷酸溶液（体积比45∶55）为流动相；流速为1.0 ml/min；检测波长为278 nm。理论板数按4?甲氧基水杨醛计算应不低于3 000。

　　2.2.2  样品溶液的制备

　　2.2.2.1  对照品溶液的制备

　　取4?甲氧基水杨醛对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1 mL含30 μg的溶液，即得。

2.2.2.2  供试品溶液的制备

　　取本品20片，除去糖衣，研细，称取细粉约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率200 W，频率40 kHz)30 min，放冷，称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　2.2.2.3  阴性对照溶液的制备

　　按舒筋活血片处方称取药材（香加皮除外），依法制成缺香加皮的舒筋活血片阴性样品。取适量阴性样品，照“

　　2.2.2.2”项下方法制成阴性对照溶液。

　　2.2.3  专属性试验

　　吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液，按照上述色谱条件测定。实验结果阴性对照对4?甲氧基水杨醛测定无干扰，说明本方法专属性强。结果见图2。

　　2.2.4  线性关系考察

　　精密吸取4?甲氧基水杨醛对照品溶液（浓度为48.4 μg/mL）1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、20.0 μL注入液相色谱仪，依法测定。以峰面积A对质量浓度ρ（μg/mL）进行线性回归分析，回归方程为A=127.38ρ-16.24（r=0.999 6），4?甲氧基水杨醛线性范围为0.048～0.968 μg。

　　2.2.5  精密度试验

　　精密吸取供试品溶液10 μL，注入色谱仪，依法测定。重复进样6次。以4?甲氧基水杨醛峰面积计算，RSD为0.96％（n＝6）。结果显示仪器精密度良好。

　　2.2.6  重复性试验

　　取同一批号的样品6份，按供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液，依法测定。平均含量是0.43 mg/片，RSD为1.54％（n＝6）。结果显示方法重复性良好。

　　2.2.7  加样回收试验

　　精密称取已知含量的舒筋活血片（批号080701，含量为0.43 mg/片，1.43 mg/g）6份，每份约0.5 g，精密称定，分别精密加入4?甲氧基水杨醛对照品溶液（浓度为0.723 mg/mL）1 mL，照“2.2.2.2”项下制成供试品溶液，依法测定。结果见表1。表1  加样回收试验结果（略）

　　2.2.8  稳定性试验

　　取同一供试品溶液，分别在放置0、2、4、8、12、24 h后，依法测定。样品含量RSD为1.87%（n=6）。表明供试品溶液在24 h内稳定性较好。

　　2.2.9  样品含量测定

　　取供试品（批号为080701、080901、081201）适量，按“2.2.2.2”项下处理，依法测定。3批样品中4?甲氧基水杨醛平均含量为0.40 mg/片。表2  舒筋活血片含量测定结果（略）

　　3  讨 论

　　3.1  按照国家食品药品监督管理局颁发的药品注册管理办法中药品研发相关指导原则，针对本品处方特点，需尽可能对处方中所有药材进行研究,且狗脊为方中臣药，因此有必要对其进行鉴别。香加皮亦为方中臣药，具有祛风湿、强筋骨的功效，反映了本制剂的功能主治。而4?甲氧基水杨醛为香加皮的有效成分，故选择其作为该制剂的一个重要质量控制指标。

　　3.2  根据4?

　　甲氧基水杨醛的紫外色谱图（见图3），在279 nm处4?甲氧基水杨醛有最大的紫外吸收，参考《中国药典》2005版一部中4?甲氧基水杨醛的测定波长［8］，选择278 nm进行检测。

【参考文献】
  　　［1］张秋红.HPLC法测定舒筋活血片的含量［J］.中国药师，2007，10（2）:150-152.

　　［2］颜慧芳.HPLC测定舒筋活血片中4?甲氧基水杨醛的含量［J］.现代食品与药品杂志，2007，17（1）：52-55.

　　［3］任晓亮，刘虹，戚爱棣，等.HPLC法同时测定香加皮中杠柳毒苷和4?甲氧基水杨醛的方法改进［J］.天津中医药，2007，24（3）：252-254.

　　［4］李天祥，张丽娟，刘虹，等.不同采收期、不同产地香加皮中4?甲氧基水杨醛的测定［J］.中草药，2007，37（8）：1256-1258.

　　［5］黄荣华，张捷.香加皮中4?甲氧基水杨醛含量测定方法的改进［J］.西北药学杂志，2008，23（3）：149-151.

　　［6］方锦霞，李书渊，肖霞，等.盆炎颗粒的薄层色谱鉴别［J］.中国现代药物应用，2008，2（7）：16-17.

　　［7］李光喜.首乌补汁的薄层色谱鉴别［J］.广东药学院学报，2003，19（1）：10-11.

　　［8］国家药典委员会.中华人民共和国药典：2005年版一部［M］.北京：化学工业出版社，2005:181.