腰痛宁胶囊的毒理学研究

关键字：  腰痛宁胶囊    急性毒性    马钱子    士的宁    大鼠    长期毒性 
　　摘要: 目的: 观察大鼠口服腰痛宁胶囊的急性毒性和长期毒性作用。 方法: 以SD大鼠为受试对象，采Bliss法测定口服腰痛宁胶囊的LD50 ;采用4个剂量（300，150，75，35.5mg/kg）iq SD大鼠，连续180d，观察给药90，180d时大鼠的生长发育、血液学、血液生化学、组织病理变化及停药30d时上述指标的变化。 结果: 雄性和雌性SD大鼠口服腰痛宁胶囊的LD50 为6158.95mg/kg和803.85mg/kg。大鼠连续给药90d时，300mg/kg剂量组碱性磷酸酶、肌酐比空白对照组升高（P<0.01）:白蛋白降低（P<0.01）;5只大鼠肝细胞脂肪变性;2只大鼠肾脏近曲小管上皮细胞高度水肿，轻度脂肪变性，管腔变大，肾小管内可见红细胞管型，肾间质少量炎细胞浸润。150mg/kg剂量组碱性磷酸酶升高（P<0.05），总蛋白和白蛋白降低（P<0.01），3只大鼠肝细胞脂肪变性。给药180d时，对大鼠体重、摄食量、活动、外周血象、主要脏器的重量系数检查未见明显影响。300mg/kg剂量组白蛋白降低（P<0.01），总蛋白、肌酐升高（P<0.0l和P<0.001）;150mg/kg剂量组白蛋白降低（P<0.001），总蛋白、肌酐升高（P<0.05和<0.001）;75mg/kg剂量组白蛋白降低，（P<0.001），肌酐升高（P<0.001），2只大鼠肝细胞轻度脂肪变性;37.5mg/kg剂量组白蛋白降低（P<0.001），总蛋白和肌酐升高（P<0.0l和<0.001）。停药30d后，大鼠体重、摄食量、活动、外周血象、重要器官脏器系数均正常。生化指标检查，各给药组同空白对照组比较肌酐升高（P<0.001）。病理学检查各组各脏器均未发现明显改变。 结论: 不同性别的SD大鼠对腰痛宁胶囊的急性毒性反应有非常著性差异，雄性大鼠LD50 比雌性高7.66倍。长期毒性研究表明，长期大剂量服用腰痛宁胶囊，对肾功能有一定影响并且恢复较慢，建议肾功能不好的患者慎用。通过对腰痛宁胶囊180d用药过程中各项指标反应的观察，未见性别差异。综合分析认为，腰痛宁胶囊在规定剂量下服用是安全可靠的。 
　　关键词: 腰痛宁胶囊; 急性毒性; 马钱子; 士的宁; 大鼠; 长期毒性
　　Abstract: Objective:To observe the acute toxicity and the long-period toxicity of Yaotongning Capsule（YTNC）in rats.Methods:LD50 were tested of YTNC in rats by Bliss methods.Four groups of rats（300.0，150.0，75.0，37.5mg/kg of YTNC）were administered with repeated gastric infusion of YTNC for180days.Body weight，hematological and hematobiochemical parameters，coefficient and histomorphological figure of organs（the heart，1iver，Spleen，1ungs，kidneys，adrenals，testes，prostate，uterus and ovary，brain，thymus）were exmined in90days，180days and30days after the cessation of YTNC.Results:The LD50 of female and male were（803.85±163.94）mg/kg and（6158.95±1021.70）mg/kg in SD rats respectively.In the long-period toxicity test，after administered repeatedly for90days，the ALP and Crea were increased，ALB were decreased，the fat in liver cells were degenerated in five rats，the epithelium cells edema of proximal convoluted tubule in two，fatly degenerated，lumens broadend and few red cells in renal tubule were observed in300mg/kg dose group.In the150mg/kg dose group，ALP were increased，TP and ALB were decreased，fat in liver cells were degenerated in three rats.After administerd repeatedly for180days，in the300mg/kg and150mg/kg dose groups，the TP and grea were increased，the ALB were decreased.In the75mg/kg dose group ALB were decreased，the crea were increased，the fat in liver cells were degenerated lightly in two rats.In the37.5mg/kg dose groups，the ALB were decreased，the TP ang crea were increased.In30days after stopping the drug，the changes of hematobiochemical，pathological and coefficient of organs could completely recover，only the crea were increased in all of the rats.Conclusion:The LD 50 of ying in male were significantly different from female in SD rats.LD 50 in male rats was7.66times as much as in female rats.YTNC administration by long-period and large dose slightly injury the renal function in rats，but the injury was slowly reversible.It is proposed that the patients suffer from renal function harmful trends would administrate carefully.It is safe to administrate the prescribed dose of YTNC.
     
　　Key words: Yaotongning Capsule; Acute toxicity; Long-period toxicity; Rat; Strychnos nux-vomica L.;Strychnine
　　腰痛宁胶囊为常用中成药，是国家中药保护品种。具有消肿止痛、疏散寒邪、通经活络的作用，在治疗腰椎间盘突出、腰椎增生、坐骨神经痛、腰肌纤维炎、慢性风湿性关节炎等疾病时具有独特的疗效 ［1］ 。因处方中含有马钱子等毒性中药，为给临床用药提供安全的实验依据，本文对腰痛宁胶囊进行了毒理学研究。 
　　1 材料和方法 
　　1.1 实验材料
　　1.1.1 动物 
　　SD大鼠120～150g，180～220g由河北省实验动物中心提供，合格证号:第04036。
     
　　1.1.2 药物 
　　腰痛宁胶囊，由承德中药集团提供，批号:20000920。实验前用蒸馏水配成不同浓度的混悬液灌胃使用。 
　　1.2 实验方法
　　1.2.1 大鼠LD50 的测定 
　　选用SD大鼠，经过预实验发现雌、雄大鼠口服腰痛宁胶囊的急性毒性反应差异很大，因此将雌、雄大鼠分别分组实验。将雌性SD大鼠分1150.00，977.50，830.90，706.20，600.30，510.03及433.707个组，组间剂量比为1∶0.85;将雄性SD大鼠分成8290.00，6800.00，5580.00和4570.00mg/kg4组，组间剂量比为1∶0.82，每组10只，体重180～220g;禁食不禁水12h，根据预先设计的剂量，按体重灌胃给药1次，给药体积为20ml/kg，给药后观察即刻及每日动物存活情况及一般表现，连续2周。记录动物死亡数，死亡动物立即尸检，如发现有肉眼可见的病理改变时，做病理检查。用DAS软件，按Bliss法计算LD50 。
     
　　1.2.2 SD大鼠的长期毒性实验 
　　将大鼠按性别和体重随机分成5组，空白对照组和A、B、C、D腰痛宁胶囊组，A组（300mg/kg）和B组（150mg/kg）每组40只大鼠，C组（75mg/kg）和D组（37.5mg/kg）每组30只大鼠，雌雄各半，给药体积为l ml/100g体重，各组均灌胃给药，每周灌胃6d，对照组灌胃等体积蒸馏水，连续给药180d，给药前及给药期间每周称动物体重1次，并按平均体重调整给药剂量。实验期间每天观察大鼠一般状态、体征、摄
食量、饮水及粪便状况。每周称体重、摄食量1次，了解对动物体重和进食的影响。给药90d，于末次给药后24h，空白对照组、A组和B组各抽取大鼠10只（雌、雄各5只）、给药180d，于末次给药后24h空白对照组和各给药组各抽取14只大鼠（雌、雄各7只）、停药后30d各组抽取6只大鼠（雌、雄各3只），用乌拉坦麻醉，从腹主动脉取血，检查血液学和血液生化学指标。血液学检查项目为:血色素（Hb）、血小板（PLT）、红细胞计数（RBC）、网织红细胞计数、白细胞计数（WBC）、白细胞分类（DC）、凝血时间。血液生化学检查项目为:天门冬氨酸氨基转换酶（AST）、丙氨酸氨基转换酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血糖（GLU）、总胆红素（T-BIL）、肌酐（Crea）、总胆固醇（T-CHO）。取血后，将各组动物处死，立即剖取动物脑、心、肝、脾、肺、肾、胸腺、甲状腺、肾上腺、子宫卵巢、睾丸、前列腺称重，根据体重计算器官重量系数。并取心、肝、肾、脾、肺、脑、肾上腺、甲状腺、胸腺、睾丸、附睾、卵巢、子宫、前列腺等脏器进行肉眼观察后用10%的甲醛溶液浸泡固定，作组织切片，H-E染色，光镜下检查组织病理学变化。 
　　2 实验结果
     
　　2.1 大鼠的急性毒性 
　　SD大鼠口服腰痛宁胶囊后几分钟内出现激惹现象，随后呼吸急促，流涎，全身抽搐，四肢强直，惊厥，雌性大鼠在灌胃后5～145min之间死亡，平均死亡时间为（38.28±43.47）min，LD50 为803.85mg/kg，95%置信限为726.05～889.99mg/kg。雄性大鼠在灌胃后5～135min内死亡，平均死亡时间为（52.45±37.36）min，LD50 为6158.95mg/kg，95%置信限为5669.25～6690.94mg/kg。死亡大鼠立即尸检，未发现肉眼可见明显病理改变，结果见表1。表1 雌性SD大鼠经口急性毒性实验（略）
    
　　2.2 SD大鼠的长期毒性实验
　　2.2.1 腰痛宁胶囊对大鼠一般情况的影响 在腰痛宁胶囊连续给药期间，给药开始3周内，各给药组大鼠出现激惹反应，神经高度紧张，只要有小的刺激，即可产生直立反应。3周后此现象消失。各给药组与对照组比较动物的活动、体重、摄食量、大便和毛发光泽等相似，未发现异常情况。A组给药第一周死亡3只大鼠，给药全程共死亡8只大鼠（死亡率20%），B组给药第1，2周大鼠各死亡1只，全程共死亡6只（死亡率15%），C组死亡1只（死亡率3.3%），D组死亡2只（死亡率6.6%），空白对照组死亡0只，肉眼尸检未见脏器异常。  表2 雄性SD大鼠经口急性毒性实验（略）
     
　　2.2.2 腰痛宁胶囊对大鼠体重增长的影响 实验结果见表3～6。表3 腰痛宁胶囊对大鼠体重的影响（略）表4 腰痛宁胶囊对大鼠体重的影响（略） 表5 腰痛宁胶囊对大鼠体重的影响（略）表6 腰痛宁胶囊对大鼠体重的影响（略） 　　从表2～表5可见，腰痛宁胶囊4个剂量对大鼠连续给药不同时间的体重，与空白对照组比较，其差异无统计学意义（P值均>0.05）。表明，腰痛宁胶囊连续用药180d，对大鼠的生长发育（体重增长）无毒性影响。
     
　　2.2.3 腰痛宁胶囊连续给药对大鼠血象的影响 实验结果见表7，表8。表7 腰痛宁胶囊连续给药3个月对大鼠血象的影响（略）表8 腰痛宁胶囊连续给药6个月对大鼠血象的影响（略）
　　由表7～8可见，腰痛宁胶囊各给药剂量组对大鼠连续给药90d时，A组中性粒细胞升高，同空白对照组比较P<0.01，B组中性粒细胞升高，淋巴细胞降低，（P值均<0.01），其余指标均无异常;给药180d时，A组、C组、和D组的白细胞计数降低（P<0.01、<0.001、和<0.05），但都在正常范围内，其它检测均正常。恢复期各组大鼠外周血象各项检查无异常，同空白对照组比较无明显差异。表明连续服用腰痛宁胶囊180d，对各给药组大鼠血象基本无明显影响。 2.2.4 腰痛宁胶囊连续给药3个月对大鼠血液生化指标的影响 实验结果见表9～12。 表9 腰痛宁胶囊恢复期对大鼠血象的影响（略）表10 腰痛宁胶囊连续给药3个月对大鼠血液生化指标的影响（略）表11 腰痛宁胶囊连续给药6个月对大鼠血液生化指标的影响（略）表12 腰痛宁胶囊恢复期大鼠血液生化指标的情况（略）
　　从表7～9可知，腰痛宁胶囊连续给药90d时，A组和B组大鼠的各项生化指标数值同空白对照组相应指标的数值比较，碱性磷酸酶升高（P<0.01和P<0.05），白蛋白降低（P<0.01），A组肌酐升高（P<0.01）;其余各项检查数值无明显变化或在正常范围内。连续给药180d时，各给药组白蛋白降低（P<0.01和P<0.001），肌酐升高（P<0.001）;停药恢复30d后，各给药组肌酐测定值仍高于空白对照组（P<0.001）。其它检测指标数值均恢复正常。表明长期服用腰痛宁胶囊对肾脏功能有一定影响。
　　2.2.5 腰痛宁胶囊连续给药3个月对大鼠主要脏器系数的影响 实验结果见表13～15。 表13 腰痛宁胶囊连续服药3个月对大鼠主要脏器系数的影响（略）表14 腰痛宁胶囊连续服药6个月对大鼠主要脏器系数的影响（略）表15 腰痛宁胶囊恢复期大鼠主要脏器系数的情况（略）
　　从表13～15可见，腰痛宁胶囊连续服用3个月时，A组和B组大鼠各主要脏器重量系数与空白对照组比较，肾、肾上腺重量系数降低（P<0.01和P<0.001）。连续给药6个月和恢复期时各个剂量组脏器重量系数与空白对照组比较均无明显差异。说明腰痛宁胶囊连续服用180d中，前90d，A组和B组大鼠的肾脏和肾上腺重量系数有一定影响，进一步的连续服用观察180d时和恢复期，对各给药剂量组各脏器系数无明显影响。
     
　　2.2.6 腰痛宁胶囊对大鼠重要器官组织的肉眼观察 
　　腰痛宁胶囊连续给药90d、180d和停药后30d（恢复期）杀取大鼠解剖取材，肉眼观察心、肝、肾、脾、肺、肾上腺、甲状腺、胃、胸腺、睾丸、附睾、卵巢、子宫、脑、前列腺等各脏器情况，各给药剂量组和空白对照组动物各脏器都未见明显病变。
     
　　2.2.7 腰痛宁胶囊对大鼠重要器官组织病理形态的影响 
　　腰痛宁胶囊连续给药90d、180d和恢复期各杀取大鼠10，14和6只，雌雄各半，将各给药剂量组和空白对照组大鼠的心、肝、肾、脾、肺、肾上腺、甲状腺、胸腺、睾丸、附睾、卵巢、子宫、脑、前列腺在相同部位取材，用10%甲醛溶液固定。切片，HE染色，进行病理学检查。检查结论如下:给药90d时，A组5只大鼠肝细胞脂肪变性;2只大鼠肾脏近曲小管上皮细胞高度水肿，轻度脂肪变性，管腔变大，肾小管内可见红细胞管型，肾间质少量炎细胞浸润。B组3只大鼠肝细胞脂肪变性，1只大鼠肾浊肿，其余各脏器未见明显异常改变。给药180d时，A组、B组和D组各脏器均正常，未见明显病理改变;C组2只大鼠肝细胞轻度脂肪变性，其余脏器未见明显病理改变，恢复期时大鼠体重、摄食量、活动、外周血象、重要器官脏器系数均正常，生化指标检查，各给药组同空白对照组比较肌酐升高，P值均<0.001。病理学检查，空白对照组和各给药剂量组大鼠各脏器未发现病理改变。 
　　3 讨论
     
　　3.1  本实验选用SD大鼠对腰痛宁胶囊进行了急性毒性实验，测定了口服该药的LD50 值。实验发现，大鼠急性毒性表现非常明显的性别差异，雄性大鼠口服腰痛宁胶囊的LD50 比雌性高7.66倍。大鼠在代谢和毒性反应上与人类较为接近［3］ ，临床使用中应注意该药急性毒性的性别差异。
    
　　腰痛宁胶囊是由马钱子、土鳖虫、全蝎、川牛膝等十几味中药组成的复方制剂。其中马钱子中的有效成分之一士的宁既是腰痛宁胶囊的有效成分，也是其有毒成分［4］ 。据文献［5］ 报道，士的宁对大鼠的急性毒性有明显的性别差异，雄性大鼠的LD50 大于雌性大鼠。大鼠口服腰痛宁胶囊表现出的性别差异有可能是所含士的宁所致，进一步的根据有待研究。一般来讲，动物毒性的性别差异机理可能是性激素影响药物代谢转化的结果。至于腰痛宁胶囊对大鼠出现的这种现象的原因和机理也有待于进一步探讨。
     
　　3.2  SD大鼠口服腰痛宁胶囊的长期毒性试验中，以300，150，75，37.5mg/kg4个剂量（分别为临床成人用量的10，5，2.5，1.25倍），对大鼠灌胃给药，与灌胃蒸馏水的空白对照组比较，开始给药前3周各给药组大鼠产生激惹现象，以后激惹现象逐渐消失，出现适应耐受增强作用。长期大剂量服用腰痛宁胶囊，对动物的一般状况、体重、摄食量、活动、外周血象、主要脏器的重量系数检查无非常明显影响，对肾功能有一定的影响并且恢复较慢，但对肾脏组织结构无明显改变。建议肾功能不好的患者慎用。通过对腰痛宁胶囊180d用药过程中各项指标的观察，未发现长期毒性实验观察指标有性别差异的毒性表现，综合分析认为，腰痛宁胶囊在规定剂量下服用是安全可靠的。 
　　参考文献:
     
　　［1］ 计福全.腰痛宁胶囊临床疗效及特点［J］.中草药1997，28（2）:125-125.
    ［2］ 徐叔云.药理实验方法学，第2版［M］.北京:人民卫生出版社，1991:201-206.
    ［3］ 周立国.药物毒理学［M］.武汉:湖北科学技术出版社，2001:20-58.
　　［4］ 李 全，朱 海，黄 涛，等.马钱子的毒理学实验研究［J］.中医正骨，2002，14（3）:137-137.
    ［5］ 秦伯益.新药评价概论［M］.北京:人民卫生出版社，1999:181-181.