金斛春冲剂安全性毒理学评价

关键字：  毒理学 

　　摘要：目的  对金斛春冲剂的食用安全性进行毒理学评价。  方法  采用急性毒性试验、遗传毒性试验(Ames试验、小鼠骨髓微核试验、小鼠精子畸形试验)、30d喂养试验进行检测评价。  结果  雌雄小鼠经口LD50均大于200g/kg体重，Ames试验、小鼠骨髓微核试验、小鼠精子畸形试验三项遗传毒性试验结果均为阴性。500g/kg体重之剂量30d喂养试验未见明显毒性作用。  结论  金斛春冲剂急性毒性分级属无毒级、无遗传毒性，初步估计最大无损害作用剂量大于5g/kg体重，相当于人体推荐摄入量的100倍。
    关键词：金斛春冲剂；急性毒性；遗传毒性；最大无损害作用剂量；食用安全性
    Abstract:Objective  To evaluate toxicologically the edible safty of Jinhuchun granule  Methods  Acute toxity test’Ames test’Micronucieus test’Sperm shape abnornality test and thirty days feeding test were performed  Results  The oral LD50 in male or female mice was higher than 200g/kgbwAmes test’micronecleus test and sperm shape abnormality were postiveNo synificant toxicity was detected in Thirty days feeding test  Conclusion  Jinhuchun granule has no acute toxicity’no genotoxicity’maximalnoobservdadverseeffect level(MNOAEL) is more than one handred times proposal daily intake amount in human
    Key words:Jinhuchun granule;Acute toxicity;Genotoxicity;MNOAEL;Edible safety
    金斛春冲剂主要成份为铁皮石斛。铁皮石斛属兰科植物，具有生津养胃，清热养阴之功效［1］。某企业拟开发利用其作为保健食品，为评价其食用安全性，我们进行了急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓微核试验、小鼠精子畸形试验和30d喂养试验。
    1  材料和方法
    11  材料  金斛春冲剂，人体每日推荐摄入量为3g/60kg体重。样品呈黄、淡黄、绿3色颗粒状。用蒸馏水将其溶解配制成所需浓度供试验使用。
    12  实验动物  昆明种小鼠，由中国科学院上海实验动物中心提供，合格证号：中科动管第003号。SD大鼠，由上海西普尔―必凯实验动物有限公司提供。合格证号：沪动合证字152号。实验动物室温度：22～27℃，湿度60%～70%。
    13  实验方法
    131  急性毒性试验  选昆明种小鼠雌雄各10只(18～22g)，试验前禁食14h，不禁水。设200g/kg体重1个剂量组，灌胃给药2次(灌胃容量为20ml/kg体重)，间隔2h，2次量合并作为1次剂量计算。观察实验动物2周，记录中毒表现及死亡情况，按毒性分级标准评价急性毒性强弱。
    132  遗传毒性试验

   1321  Ames试验  采用平板掺入法，选鼠伤寒沙门氏菌突变型菌株TA97、TA98、TA100和TA102，经基因型鉴定合格后进行实验。具体方法参照文献［2］。
    1322  小鼠骨髓微核试验  选昆明种小鼠60只(25～３０g)，随机分为6组，雌雄各半。设125、250、500、1000g/kg体重4个剂量组、阴性对照组(蒸馏水)及阳性对照组(环磷酰胺40mg/kg体重)。具体方法参照文献［2］。
    1323  小鼠精子畸形试验  选雄性昆明种小鼠25只(25～35g)，随机分为5组，每组5只。设250、500、1000g/kg体重3个剂量组、阴性对照组(蒸馏水)及阳性对照组(环磷酰胺30mg/kg体重)。具体方法参照文献［2］。
    133  30d喂养试验  选SD大鼠80只，其中雄性40只，体重为(943±78)g；雌性40只，体重为(888±108)g。将实验动物随机分为4组，每组20只，雌雄各半。设125、250、500g/kg体重3个剂量组(相当于人体推荐摄入量的25、50、100倍)和1个对照组，具体方法参照文献［2］。实验结束观察体重、总食物利用率、血常规指标、血液生化学指标和进行病理学检查。
    14  实验数据的分析与处理  全部数据采用SPSS软件包进行统计处理(小鼠骨髓微核试验用双侧t检验，小鼠精子畸形试验用Wilcoxon秩和检验，其余用单因素方差分析)。
    2  结果
    21  急性毒性试验  给予受试物后，各组动物饮食和活动正常，生长发育良好，均未见明显中毒反应，无一死亡。该样品雌雄小鼠经口LD50均大于200g/kg体重，根据急性毒性分级标准，属无毒级。
    22  遗传毒性试验
    221  Ames试验  各剂量组的回变菌落数均未超过空白对照组的2倍，而阳性对照组的回变菌落数均超过空白对照组的2倍。
    222  小鼠骨髓微核试验  经双侧t检验，各剂量组雌雄小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率与阴性对照组比较差别无显著性(P＞005)；而阳性对照组微核率与阴性对照组比较差别具有高度显著性(P＜001)。
    223  小鼠精子畸形试验  经Wilcoxon秩和检验，各剂量组精子畸形率与阴性对照组比较差别无显著性(P＞005)；而阳性对照组精子畸形率与阴性对照组比较差别具有高度显著性(P＜001)。
    23  30d喂养试验
    231  一般表现  实验期间各组动物活动正常，未见明显中毒反应。
    232  对大鼠体重、总食物利用率的影响  经方差分析，各组雌雄鼠体重、进食量、食物利用率与对照组比较差别无显著性(P＞005)。结果见表1。表1  金斛春冲剂对大鼠总食物利用率的影响
    233  血常规检查结果  雌雄鼠各剂量组血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数及其分类与对照组比较差别无显著性(P＞005)，表明该样品对大鼠血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数及其分类无明显影响。
    234  血液生化检查结果  雌雄鼠各剂量组血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三酯、血糖、总蛋白、白蛋白与对照组比较无明显异常改变。结果见表2。表2  金斛春冲剂对大鼠生化指标的影响
    235  病理组织学检查  各剂量组动物解剖大体观察末见有异常变化。各剂量组肝体比、肾体比、脾体比和睾丸体比或卵巢体比与对照组比较差别无显著性(P＞005)。病理组织学检查可见，镜下高剂量组动物肝脏浆膜完整，中央静脉、肝小叶、门管区结构清楚，肝细胞索围绕中央静脉呈放射状排列；肾脏被膜完整，皮质肾小球、肾小囊结构清楚，肾小管排列规则；胃肠浆膜、肌层、粘膜、粘膜下层结构清楚；脾被膜完整，红髓、白髓结构清楚；睾丸白膜完整，可见各级生精细胞；卵巢白膜完整，可见各级卵泡。均未见病理组织学改变。
    3  讨论
    目前，国内开发铁皮石斛作为食品或保健食品的报道不多，其毒理学研究资料也不多，为确保金斛春冲剂食用安全，依据卫生部《食品安全性毒理学评价程序和方法》［2］的规定，我们选择了一组试验检测金斛春冲剂的急性毒性、遗传毒性和无损害作用剂量。实验结果表明，金斛春冲剂雌雄性小鼠经口LD50大于200g/kg体重，根据急性毒性分级标准，属无毒级；小鼠精子畸形试验、Ames试验、小鼠骨髓微核试验结果均为阴性；30d喂养对雌雄大鼠体重、总食物利用率、脏体比、血常规以及血液生化指标均无明显影响，肝、肾、脾、胃、十二指肠、睾丸和卵巢均未见病理组织学改变。初步估计金斛春冲剂的最大无损害作用剂量大于5g/kg体重，相当于人体推荐摄入量的100倍。综上所述，金斛春冲剂在本实验研究剂量范围内对人体不产生有害作用，可安全食用。
    参考文献：
    ［1］ 中药大辞典［M］第1版上海：上海人民出版社，1977，7：1209～1210
    ［2］ 中华人民共和国卫生部食品安全性毒理学评价程序和方法(GB15193)［S］199411～41