不同种不同药用部位不同产地千斤拔中总黄酮的含量测定

常见妇科疾病以经前期综合症、阴道炎症、乳腺增生3大疾病最为明显，其中阴道炎症为常见和多发妇科疾病，严重影响患者的生活质量。目前市面上治疗效果和销量较好的妇科千金片对阴道炎症有良好的治疗作用，为女性妇科炎症首选药物;千斤拔为其君药，处方：千斤拔、金樱子根、党参、当归等;功效：补血、补气、消炎、祛湿、强腰通络，用于妇女急慢性盆腔炎、子宫内膜炎、宫颈炎、白带多等病症。《中华人民共和国药典》2005版·Ⅰ部附录中收载千斤拔为豆科植物蔓性千斤拔M.philippinensis(Merr. et Rolfe)Li、大叶千斤拔M.macrophylla(Willd.)O.Kuntze或绣毛千斤拔M. ferruginea(Wall.ex Benth.)Li.的干燥根[1]，地方药用的有球穗千斤拔M. strobilifera(Linn.)Ait.、腺毛千斤拔M. glutiaosa (Prain)Y.T.Wei、宽叶千斤拔M.Latifolia Benth.等种，用于治疗风湿痹痛、腰腿痛、风湿关节炎、腰肌劳损、阳痿、遗精、妇科病、乳房疾病等病症[2]。蔓性千斤拔、大叶千斤拔分布较广，主产于江西、福建、台湾、湖北、湖南、广西、广东、四川等省区;球穗千斤拔和宽叶千斤拔未形成大宗商品，但可见到混淆于千斤拔的商品药材中[3]。文献报道千斤拔含有黄酮、多糖、生物碱、β-黄酮等多种成分[2]。现代研究表明黄酮类化合物能防治心脑血管系统和呼吸系统的疾病，具有抗炎抑菌、降血糖以及增强免疫功能等药理作用[4]。本实验拟采用紫外-可见分光光度法测法测定不同药用部位、不同产地5个种总黄酮的含量，评价其不同药用部位、不同产地5个种的药材质量，以期寻找新药源和新的药用部位。

　　1仪器与试药

　　Unicam UV-500(Thermo electron corporation)，KQ-250B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，METTLER AE240电子分析天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司];芦丁(100080-200306，中国药品生物制品检定所提供,含量测定用)。乙醇等试剂均为分析纯;千斤拔药材产地见表1~2。经刘圆、戴斌、彭朝忠副教授鉴定分别为蔓性千斤拔M. philippinensis(Merr. et Rolfe)Li、大叶千斤拔M. macrophylla(Willd.)O.Kuntze、球穗千斤拔M. strobilifera(Linn.)Ait.、腺毛千斤拔M. glutiaosa (Prain)Y.T.Wei、宽叶千斤拔M. Latifolia Benth.的干燥根、茎、叶。

　　2方法与结果

　　2.1供试品溶液制备

　　2.1.1对照品溶液制备精密称定芦丁对照品适量，加70 %乙醇配成18.34 μg·ml-1的对照品溶液。教育学论文发表

　　2.1.2测定波长的选择精密量取对照品溶液1 ml，按“2.2”项下方法自“以70 %乙醇补足为4 ml”起进行显色，并在200～600 nm波长下进行全波长扫描，结果发现最大吸收波长为510 nm。

　　2.1.3样品溶液的制备分别称取千斤拔药材(10目)约1 g,精密称定，加入料液比为1∶14的60 %乙醇，回流提取3 h，提取2次，滤过，滤液定容至100 ml。吸取定容后的溶液1 ml，挥去溶剂，残渣用70 %乙醇4 ml溶解，移至10 ml容量瓶中，作为样品溶液。

　　2.2标准曲线的制备精密移取标准溶液0.0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5 ml分别置于10 ml具塞试管中。以70 %乙醇补足至4 ml，加5 %亚硝酸钠0.4 ml，放置6 min后，加10 %硝酸铝0.4 ml，放置6 min，再加4 %氢氧化钠4 ml，用70 %乙醇定容，摇匀，放置15 min，于510 nm处测定吸收度A，得回归方程为：Y=13.20 3X-0.019 6，r=0.999 6。结果芦丁在9.17～64.19 μg范围内呈良好的线形关系。
2.3方法学考察

　　2.3.1精密度实验取同一对照品溶液，按“2.2”项下方法处理并显色后，重复测定吸光度6次，RSD为1.38 %。结果表明精密度良好。

　　2.3.2重复性实验取同一样品溶液，按“2.2”项下方法处理并显色后，重复测定吸光度6次，RSD为1.64 %。结果表明重现性良好。

　　2.3.3稳定性实验取样品溶液，照样品测定方法操作，每隔0.5 h测定吸光度值，连续4 h，结果吸光度值基本无变化，结果表明样品稳定性良好。

　　2.3.4加样回收率实验称取已知总黄酮含量的样品粉末1 g，精密称定，9份，依次加入不同量的芦丁对照品，置圆底烧瓶中，按照样品的制备方法制备，精密量取样品溶液1 ml挥干溶剂，用70 %乙醇溶解于10 ml容量瓶中，按照“2.2”项下方法，以芦丁标准溶液作对比测定，计算总黄酮回收率为99.63 %，RSD为1.36 %(n=9)。

　　2.4样品含量测定称取药材粉末(过10目筛)约1 g，精密称定，按照“2.1.3”项下样品的制备方法制备样品，精密量取样品溶液0.3 ml于蒸发皿中水浴蒸干，用甲醇溶解于具塞试管中，按照“2.2”项下方法测定吸收度，按下式计算总黄酮含量。结果见表1~2。总黄酮含量(%)=CVD/W×100 %。 式中：C为总黄酮显色稀释后的浓度(mg/ml),V为稀释后的体积ml，D为样品的稀释倍数，W为样品的质量(g)。表15个种不同药用部位样品中总黄酮的含量测定结果表2不同产地3个种千斤拔根的样品中总黄酮的含量测定结果

　　3讨论教育学论文发表

　　通过紫外-可见分光光度计测定药材中总黄酮含量常见报道[3~7]，该方法具有简单可靠、方法成熟的特点，故本实验采用该方法测定总黄酮的含量。本实验对千斤拔提取法进行了单因素考察，选取了最佳提取方法、最佳药材粉碎度、提取温度、提取时间等因素，并通过正交设计实验，优选出合理的提取工艺参数。不同种千斤拔中，与蔓性千斤拔、大叶千斤拔(药典收载)比较，球穗千斤拔、宽叶千斤拔根中总黄酮的含量较低，腺毛千斤拔根中总黄酮的含量接近;各个种叶中总黄酮的含量普遍较高，茎中量较低。建议对不同种茎、叶及腺毛千斤拔根进行药理研究，考察其能否作为新的替代药用资源同等入药。不同产地千斤拔根中，大叶千斤拔以购于四川成都(云南产)含量最高，蔓性千斤拔采于湖北宜昌夷陵区含量最高，球穗千斤拔含量均较低，但同时也表明云南、湖北、广西、广东等地的药材质量较好。　　因野外采样不全的原因，未能对同产地、同采收期3种千斤拔药材进行测定，正在进一步研究。　由于大多数药材均为野生和购买，所以很难确定其准确的生长期，有待继续进行栽培种的进一步研究。