从益母草主要有效成分分析看其人工种植的必要性

【论文摘要】  目的 考察益母草野生品和栽培品中主要有效成分水苏碱和多糖的含量，为人工种植益母草的必要性提供依据。方法 分别采用薄层扫描法测定水苏碱，分光光度法测定多糖。结果 栽培品中水苏碱和多糖含量普遍比野生品含量高，且含量变化有一定规律性。结论 为保证益母草药材质量，应该采用人工种植为好。

【关键词】  益母草;水苏碱;多糖

益母草来源于唇形科植物益母草 (Leonurus japonicus Houtt.)的新鲜或干燥的地上部分,为妇科经产要药[1，2]。本实验为考察黔产益母草野生品和栽培品的质量,通过测定益母草中主要有效成分水苏碱和多糖的含量[3，4]，对益母草野生品和栽培品的质量进行比较，为人工种植益母草提供依据,达到提高益母草药材质量的目的。

1 仪器、试剂与药材

　　1.1 仪器与试剂 CS-9301PC双波长飞点层析扫描仪(日本岛津公司);CAMAG LINOMAT V半自动点样仪(瑞士卡马公司);定量毛细管(美国MICROCAPS公司);XS205双量程电子分析天平，量程：万分之一和十万分之一两档(梅特勒-托利多仪器上海有限公司);硅胶G板(青岛海洋化工厂);DU-70紫外-可见分光光度计(美国BACKMAN公司);盐酸水苏碱对照品购自中国药品生物制品检定所，批号：110712-200407;苯酚、浓硫酸和葡萄糖等其他化学试剂均为分析纯;水为蒸馏水。

　　1.2 药材 分别采自贵州省惠水县和贵阳市郊乌当，药材样品均经贵阳中医学院魏升华讲师鉴定为红花益母草Leonurus japonicus Houtt.，本实验均用益母草地上部分。

2 方法与结果          论文投稿 医学论文发表

　　2.1 水苏碱的分析[5]

　　2.1.1 供试品溶液和对照品溶液的制备 精密称取干燥益母草样品粉末约1g，置圆底烧瓶中，加入乙醇约50ml，加热回流1.5h，放冷，滤过，滤渣及回流容器用乙醇50ml分次洗涤，合并滤液和洗液，蒸干，残渣用乙醇溶解，转移至10ml容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，离心(5000转/min，5min)，取上清液作为供试品溶液。精密称取在105℃干燥3h的水苏碱对照品适量，加乙醇制成每1ml含2.030mg的溶液，作为对照品溶液。

　　2.1.2 薄层色谱分析条件 用硅胶G薄层板，点状点样，点样量10μl。以正丁醇-盐酸-乙酸乙酯(8：3：1)为展开剂，展开，取出晾干后，在 105℃加热15min，放冷，喷以稀碘化铋钾试液-1%三氯化铁乙醇溶液(10：1)混合溶液至斑点显色清晰，晾干，立即在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布密封。反射法单波长锯齿形扫描。波长λS=510nm，狭缝0.4mm×0.4mm。在上述分析条件下对薄层色谱进行扫描分析。

　　2.1.3 线性关系的考察 用半自动点样仪在同一硅胶G薄层板上点盐苏碱对照溶液2、4、6、8、10、12、14μl，用上述条件展开显色后进行薄层扫描测定，以点样量(μg)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，求出回归方程为：Y = 185.75X - 411.09，r=0.996，表明水苏碱在4.06～28.42μg范围内线性关系良好。由于直线不通过原点，因此用外标两点法计算含量。

　　2.1.4 稳定性考察 在同一块薄层板上分别点8μl样品溶液和10μl对照品溶液，依上述色谱条件和扫描条件操作，分别在0、0.5、1、1.5、2h扫描测定盐酸水苏碱峰面积，结果峰面积的RSD为0.38%，表明盐酸水苏碱在本实验条件下2h内稳定。

　　2.1.5 同板精密度和异板精密度试验 分别在同一薄层板上和在另外5块薄层板上点同一供试品溶液五个点，每个点10μl，并以水苏碱对照品溶液3、8μl作为随行标准，分别扫描测定其峰面积，按上述分析条件测定，以峰面积计算，同板精密度RSD为1.00%，异板精密度RSD为1.90%。

　　2.1.6 重复性试验和回收率试验 分别称取同一益母草药材5份，按2.1.1“供试品溶液的制备”和2.1.2“薄层色谱分析条件”操作，测得水苏碱平均含量为1.09%，RSD为2.52%。精密称取盐酸水苏碱平均含量为1.09%的益母草药材5份，每份约0.5g，精密加入水苏碱对照品5.00mg，同时加入约50ml乙醇回流提取，按上述“供试品溶液的制备”方法和“薄层色谱分析条件”进行溶液制备和测定，结果5次回收率平均值：99.76%，RSD=1.34%。

　　2.1.7 含量测定与结果 按上述“供试品溶液制备方法”和“ 薄层色谱分析条件”对各样品进行溶液制备和测定，结果见表1。表1 益母草样品中水苏碱和多糖含量测定结果

　　2.2 多糖的分析[6]           论文发表 CSSCI论文发表

　　2.2.1 供试品溶液和对照品溶液的制备 精密称取干燥益母草粉末约0.3g，置圆底烧瓶中，精密加入50ml蒸馏水后称重，加热回流提取3h，冷却后称重，用水补足损失量，摇匀，过滤，弃去初滤液，取续滤液4ml于50ml容量瓶中，用水定容至刻度，作样品液。从样品液中精密量取2ml于25ml比色管中，分别精密加入5%的苯酚1ml、浓硫酸5ml,摇匀，置沸水浴中保持15min后取出，冷至室温，即为供试品溶液。精密称取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖适量，用水制成每1ml含56.17μg的溶液，作对照品溶液。

　　2.2.2 标准曲线的制作 精密吸取56.17μg/ml葡萄糖对照品溶液0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8、2.0ml,分别置于25ml比色管中,体积不足2ml者用水补足至2ml,以下按2.2.1“供试品溶液的制备”项下“分别精密加入5%的苯酚1ml”起，同法操作即得。以相应试剂为空白，于491nm 波长处测定吸光度。以吸光度A为纵坐标,浓度C为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程：A = 0.0592C- 0.00113; r = 0.9997

　　结果表明葡萄糖在2.1064～14.0425μg/ml范围内，线性关系良好。

　　2.2.3 精密度和稳定性实验 用同一供试品溶液连续5次测定其吸光度和每隔1h测定一次吸光度,共测定4 次，计算出精密度实验的RSD%为0.22;稳定性试验的RSD%为0.55。表明仪器精密度良好，显色后的溶液3h内稳定。

　　2.2.4 重复性试验和回收率试验 精密称取2005年6月采收的惠水野生益母草样品5份,每份约0.3g，按2.2.1“供试品溶液的制备”方法制备供试溶液,按2.2.2“标准曲线的制作”项下的相同测试条件进行测定。样品含量平均值为4.46%，RSD%为0.79。精密称取已知多糖平均含量为4.46%的益母草供试品5份，每份约0.16g，分别精密加入浓度为0.142g/ml的葡萄糖对照品溶液50ml，以下按2.2.1“供试品溶液的制备”方法制备供试溶液，按2.2.2“标准曲线的制作”项下的相同测试条件进行测定，结果平均回收率为98.87%，RSD%为0.71。

　　2.2.5 样品含量测定 按“2.2.1” 项供试品溶液制备方法制备供试品溶液，用“2.2.2” “标准曲线的制作”项下的相同测试条件对各样品进行多糖含量测定(含量按葡萄糖计)结果见表1。

　　3 讨论         论文投稿 论文发表期刊汇总

　　水苏碱是益母草的主要药用成分之一，而多糖虽不是益母草的主要药用成分，但对许多疾病的辅助治疗作用却不可忽视。由实验数据看出，人工种植益母草中水苏碱含量在开花前随生长年限变化呈递增趋势，此时益母草中的多糖含量也相对较高。而到果期水苏碱含量明显下降的同时，多糖含量也明显下降。多糖类化合物广泛存在于植物细胞壁中，也就是说多糖的存在是水苏碱在植物体内合成的一种保障，果期由于植物体内大量消耗糖分，水苏碱的合成也相应降低，含量也随之降低。人工种植益母草与野生益母草相比，由于注意管理，人工种植益母草中水苏碱和多糖含量较高，而野生益母草中却相对较低。

　　从人工种植益母草中水苏碱和多糖含量变化有一定规律来看，中药制剂的质量首先是原料药材的质量要得到保证，其质量才可控，而野生益母草生长年限难以确定，水苏碱和多糖含量变化也不易掌握，因此用其作为原料生产的复方制剂质量也难以保证。人工种植益母草是中药制剂质量控制的一个发展方向，掌握其最佳采收时间，控制原料药材的质量，也就保证了中药制剂质量的稳定。所以，益母草由野生转为人工种植势在必行。

【参考文献】
  　　1 范美华，王健鑫，李 鹏，等.益母草的研究进展.中药药物与临床，2006，6(7)：528.

　　2 张娴，彭国平.益母草属化学成分研究进展.天然产物研究与开发，2003，15(2)：162-166.

　　3 刘吉成,牛英才.多糖药物学.北京： 人民卫生出版社,2008，1.

　　4 吴华振.植物多糖的药理作用及应用进展.实用医技杂志， 2005，12(7)：1803-1804.

　　5 国家药典委员会.中国药典(一部).北京：化学工业出版社，2005，203.

　　6 高言明,陈海云,龚 飞.中药金樱子不同采收期多糖的含量分析. 贵阳中医学院学报，2005，27(1)：57-58.