抗角蛋白抗体定量分析对类风湿关节炎诊断及病情评估的探讨

 类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）是一种以慢性进行性关节病变为主的全身性自身免疫病，寻找特异性检测指标对RA进行早期诊断已成为近年来RA研究的热点[1]。抗角蛋白抗体(anti-keratin antibody, AKA)是1979年Young等[2]人以Wistar大鼠食管组织为底物，用间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence, IIF）检测患者血清时发现的一种对RA特异的与角质层成分反应的IgG型抗体。本研究旨在探讨AKA定量分析对RA诊断及病情评估的应用价值。

　　1  对象与方法

　　1.1  研究对象

　　RA组53例，系2004年7月至2005年1月宁夏医学院附属医院风湿免疫科门诊及住院的RA患者，符合1987年美国风湿病协会（ARA）修订的RA诊断分类标准[1]。其中男性14例，女性39例，男∶女＝1∶2.8；年龄17～80岁，平均49.96岁。非RA组62例，系同期宁夏医学院附属医院内科进行AKA检测的、以国际诊断标准[1]排除RA的其它疾病住院患者；其中男性13例，女性49例，男∶女＝1∶3.8；年龄17～82岁，平均43.39岁；两组研究对象年龄、性别具可比性。

　　1.2  主要仪器

　　80℃低温冰箱（日本三洋），荧光显微镜（Olympus BX60），Array-360特种蛋白全自动分析仪（美国Beckman），Beckman Coulter LH 750 Analyzer，离心机（北京医用离心机厂生产LD 4－2）。医学类论文发表

　　1.3  研究方法

　　IIF法检测AKA，试剂来源于德国欧蒙医学实验诊断有限公司。在AKA定性检测中出现阳性者，进一步倍比稀释血清至1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640、1∶1280或直至检测结果为阴性。速率散射比浊法检测RF，试剂来源于美国Beckman公司。

　　1.4观察指标

　　记录RA患者的一般情况（年龄、疾病病程）、临床指标（有无晨僵、有无手关节畸形、握拳程度、疼痛关节数、压痛关节数、肿胀关节数）和实验室指标（AKA滴度、RF浓度、CRP、ESR、IgG、IgA、IgM、C3、C4、RBC、Hb、WBC、PLT、NE%），计算疾病活动性评分（Disease Activity Score-28, DAS28）[3]，RA患者摄双手正位片。非RA组记录AKA检测结果。
1.5  统计学处理

　　所有数据全部录入计算机，采用SPSS 11.5统计软件进行统计分析。采用四格表计算抗体的敏感度和特异度；引入受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve, ROC曲线）判断AKA检测的最佳阳性界值点；AKA滴度与各临床和实验室指标之间的相互关系采用Spearman相关性分析。所有假设检验的检验水准定为α＝0.05。

　　2  结果

    血清不同稀释度定为判断AKA的阳性界限时AKA检测结果见表1。表1血清不同稀释度定为阳性界限时AKA检测结果（略）

　　从临床效果进行评价，对血清不同稀释度定为判断AKA的阳性界限时AKA检测对RA诊断的敏感度和特异度引入ROC曲线，结果显示血清稀释度1∶10为AKA检测对RA诊断的最佳阳性界值点，见图1。

    AKA滴度对数值与病人特征及各检查、检测结果的相关性分析见表2。

　　3  讨论

    本实验结果显示，以不同血清稀释度作为判断AKA的阳性界限时，血清稀释度越高，AKA阳性的例数越少。本研究通过引入ROC曲线，对血清不同稀释度时AKA检测对RA诊断的临床效果进行评价，结果显示血清稀释度1∶10为兼顾AKA检测对RA诊断敏感度和特异度的最佳阳性界值点。表2RA组AKA阳性者AKA滴度对数值与病人特征及各指标相关性分析结果（略）

    有实验表明AKA对RA诊断的特异度与其血清稀释度有一定关系，1∶10作为阳性界限时特异度为96.5%, 1∶40时达100%，建议AKA检测时亦应报告滴度大小，以便能够作出更加肯定的诊断[4]。本实验结果与之一致，AKA检测对RA诊断的特异度随血清稀释度的增加而增高，以1∶10定为阳性界限时，AKA特异度为96.8%，非RA组有2例AKA阳性，一例诊断为系统性红斑狼疮，另一例诊断为多发性肌炎；以1∶20定为阳性界限时，AKA特异度已达100%，提示AKA定量分析有利于疾病的诊断和鉴别诊断。医学类论文发表

    国外对67例RA患者(40% IgG型AKA阳性)2年的随访研究发现AKA阳性患者较阴性患者，无论是在临床、实验室、还是X线检查方面都具有更强的疾病活动过程，并发现抗体的滴度变化与疾病活动相平行，认为检测IgG型AKA对RA具有诊断和判断预后的作用[5]。

    本实验通过Spearman相关性分析发现AKA滴度对数值与患者疾病病程、双手和腕关节X线片分期、RF浓度呈正相关且有统计学意义，与DAS28呈一定程度的正相关，与Hb水平呈一定程度的负相关；与年龄、有无晨僵、有无手关节畸形、握拳程度、疼痛关节数、压痛关节数、肿胀关节数及CRP、ESR、IgG、IgA、IgM、C3、C4、RBC、WBC、PLT、NE%检测值水平无明显关系，提示AKA滴度与RA的病情严重程度、疾病活动度以及关节侵蚀程度密切相关。

    综上所述，我们认为从临床效果进行评价，血清稀释度1∶10为对RA诊断的最佳阳性界值点；AKA对RA诊断的特异度与其血清稀释度有一定关系，血清稀释度越高，特异度越强，对RA患者进行AKA定量分析有助于疾病的诊断和鉴别诊断。AKA滴度水平与RA病情严重程度和疾病活动度相关，高滴度的AKA预示着RA的放射学破坏较严重，因此，建议在临床工作中对AKA进行定量分析，有利于RA的早期诊断、鉴别诊断、病情监测和指导治疗。