摘要：目的探究山银花混合对照品溶液有效期，以规定其使用期限。方法在验证中，采用留样观察法来确定已配制的混合对照品溶液及其流动相在规定贮存状态下的使用有效期。结果山银花混合对照品溶液按规定方法贮存，30日内稳定；其流动相5日内稳定。结论本研究通过对山银花混合对照品溶液及其流动相稳定性的考察，明确了其使用期限。
关键词：对照品溶液；稳定性；留样观察法
中图分类号：R197.32文献标识码：A文章编号：1671-5837(2018)06-0208-02
Validity Validity Validity Validity Verification of Yin-Hua Mixed Reference Product
Taojingmei Tiansirui
Jinling Pharmaceutical Co., Ltd.. Nanjing Jinling Pharmaceutical Factory,Jiangsu Nanjing 210000
Abstract:Objective To explore the validity period of mixed reference substance solution of honeysuckle. MethodsThe validity period of mixed referencesubstance solutionandmobile phasewasdetermined bystorage specimen test.ResultsThe mixed reference substancesolution of honeysuckle was stable within 30 days and the mobile phase was stable within 5 days. ConclusionTheuseful life of reference substancesolutionandmobile phase was determined bystability test.
Keywords:reference substance solution;stability;long-storage specimen test
对照品、标准品系指用于鉴别、检查、含量测定的标准物质[1,2]。在我厂实际应用中，多将其配制成一定浓度的混合对照品溶液进行使用。不同的混合对照品溶液因其自身的化学和物理性质不同，在使用过程中，可能会出现挥发、降解等现象。《药品生产质量管理规范》要求使用单位应对对照品溶液的稳定性和使用效期进行验证，通过研究结果来确定内部有效期[3]。
此次验证的绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙混合对照品溶液用于我厂山银花药材中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量的检测。山银花药材为我厂脉络宁注射液处方中的一味药材[4]，如每次检验都重新配制混合对照品溶液，不仅延长检验时间，而且浪费价格昂贵的对照品。在验证中，采用留样观察法[5]来确定已配制的绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙混合对照品溶液及其流动相在规定贮存状态下的使用有效期。
1 仪器与试药
1.1 仪器
日本岛津LC-20AD(SPD-20A)高效液相色谱仪；海尔冰箱SC-192；Sartorius BP211D分析天平
1.2 试剂
绿原酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110753-201415，96.2%）；灰毡毛忍冬皂苷乙（中国食品药品检定研究院，批号：111814-201604，94.4%）；川续断皂苷乙（中国食品药品检定研究院，批号：111813-201403，92.2%）；纯化水；乙酸（Merck，色谱纯）；乙腈（Merck，色谱纯）
2 方法与结果
2.1 混合对照品溶液流动相的配制和贮存
混合对照品溶液配置方法：取绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙混合对照品适量，精密称定，加50%甲醇溶液制成每1mL含绿原酸0.5mg、灰毡毛忍冬皂苷乙0.6mg、川续断皂苷乙0.2mg的混合溶液，即得。
山银花流动相配制方法：水相为0.4%醋酸溶液，有机相为乙腈。贮存条件：密闭，冰箱低温保存（0℃-10℃）。
2.2 色谱条件与系统适用性试验
按山银花质量标准含量测定项下方法检验[6]。
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.4%醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；绿原酸检测波长330nm；皂苷用蒸发光散射检测器检测。理论塔板数按绿原酸峰计不低于1000。
测定法：精密量取混合对照品溶液2μL、10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以外标两点法计算绿原酸的含量，以外标两点法对数方程计算灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量。
2.3 稳定性研究留样考察方法
2.3.1 混合对照品溶液
分别制备两份混合对照品溶液(标示为混合对照品溶液Ⅰ、混合对照品溶液Ⅱ)，在零时间点，对每份混合对照品溶液分析两次，互相复核。在零时间点以外的测试点，新鲜配制一份混合对照品溶液，对新鲜配制的混合对照品溶液和用于研究效期的两份混合对照品溶液分析两次。用新鲜配制的混合对照品溶液的平均相应值，来计算用于研究效期的两份混合对照品溶液的含量值。
测试时间点：混合对照品溶液效期验证检测点为0天、1月、2月为检测点。
每个测试时间点的结果都是用新鲜配制的混合对照品溶液的平均响应值来重新计算用于研究效期的两份混合对照品溶液的含量值，计算基于下面的计算公式：
绿原酸的线性方程：A=kC+b
灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的线性方程：lgA=klgC+b
A：新鲜配制的混合对照品溶液峰面积
C：新鲜配制的混合对照品溶液浓度
K：直线斜率
b：直线截距
2.3.2 流动相溶液
按标准方法配制2000mL流动相溶液，封口，冰箱低温保存。检验日取适量，放置室温后用于样品测定。流动相效期验证测试时间点的设置，由方法的特殊性和山银花检测频率来决定，蒸发光散射检测器检测所需流动相必须临用现配，紫外检测器检测所需的流动相观察其溶液物理特性，如澄清度，测试点为0-5
对照品混合溶液在第0、15、33、45、69天，溶液澄清透明，无明显浑浊；流动相溶液在第0、1、2、3、4、5天溶液澄清透明，无明显浑浊，外观检查均合格。
3 讨论
在检验周期30天之内，按规定方法（密闭，冰箱低温保存0℃-10℃）保存原混合对照品溶液，其性状及含量检测结果无显著性差异，说明山银花混合对照品溶液按规定方法贮存在30天内有效，可满足山银花药材对绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量测定的要求。这不仅可以节约成本，也有利于缩短检测时间，提高检测效率，有效指导生产。
参考文献
[1]朴君红，崔永学.药品检验中对照品使用的常见问题探析[J].中国现代药物应用，2011，05(19):135-135.
[2]刘伟强，颛孙燕，柳涛.标准品和对照品管理、使用中的若干问题探讨[J].上海医药，2007，28(5):231-232.
[3]国家食品药品监督管理局药品认证管理中心.药品GMP指南-质量控制实验室与物料系统[S].北京:中国医药科技出版社，2011:88-90.
[4]朱蓉贞，贾晓斌.脉络宁注射液质量标准研究[J].中成药，1990(1):13-15.
[5]徐凤兰.留样观察法分析葡萄糖注射液中5-羟甲基糠醛的含量变化[J].首都食品与医药，2000，7(1):33-33.
[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：化学工业出版社，2010：205.
